等電位聚焦是一種根據(jù)分子攜帶的電荷不同來(lái)分離分子的技術(shù)。蛋白質(zhì)同時(shí)具有酸性基團(tuán)和堿性基團(tuán)，在ph值低于等電點(diǎn)時(shí)會(huì)帶有正電荷，在電場(chǎng)中向陰極移動(dòng)。將蛋白質(zhì)置于有遞增ph梯度的凝膠中電泳，蛋白質(zhì)所帶電荷會(huì)一直減少，直到蛋白質(zhì)移動(dòng)到ph值與其等電點(diǎn)相同的區(qū)域。在此處，蛋白質(zhì)靜電荷為0，因此停止運(yùn)動(dòng)，最終蛋白質(zhì)被“聚焦”在ph值和其等電點(diǎn)相同的窄帶中。

　　蛋白實(shí)驗(yàn)蛋白質(zhì)雙向電泳實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：

　　1.TCA：TCA有毒性，有刺激性氣味，損害呼吸道、眼睛及皮膚，稱量時(shí)應(yīng)戴手套及口罩，避免沾到皮膚及吸入，若不慎接觸，應(yīng)立即用大量水沖洗后就醫(yī)。TCA易潮解，稱量時(shí)應(yīng)迅速。

　　2.PMSF：PMSF有毒，嚴(yán)重?fù)p害呼吸道粘膜、眼睛及皮膚，稱量時(shí)應(yīng)戴手套及口罩，避免沾到皮膚及吸入，若不慎接觸，應(yīng)立即用大量水沖洗后就醫(yī)。PMSF溶于異丙醇后置于-20℃長(zhǎng)期保存，保存中易析出結(jié)晶，用前取出待結(jié)晶溶化后再使用

　　3.甲醛：有刺激性氣味，易揮發(fā)，其蒸汽強(qiáng)烈刺激粘膜、眼睛，具有致癌性。使用時(shí)應(yīng)戴手套及口罩，在通風(fēng)櫥內(nèi)操作。

　　4.甲醇：有毒，能引起失明。DTT：很強(qiáng)的還原性，散發(fā)難聞的氣味?？梢蛭?、咽下或皮膚吸收危害健康。當(dāng)使用固體或高濃度儲(chǔ)存液時(shí)，戴手套和護(hù)目鏡，在通風(fēng)櫥中操作。beta-巰基乙醇：可致命，對(duì)呼吸道、皮膚和眼睛有傷害。丙酮：對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)有麻醉作用，并對(duì)黏膜有刺激作用。